Giải đáp tt sinh hóa

Cau hoi cua Doan Ngoc Trung
1. Sự di chuyển của các vạch sắc tố trên bản sắc kí (sắc kí bản mỏng và sắc kí giấy) phụ thuộc vào những yếu tố nào?
Câu này anh không trả lời, em phải tự phân tích.
2. Trong sắc kí có pha tĩnh phân cực (silicagel) và không phân cực (sắc kí giấy), pha tĩnh có tương tác gì với sắc tố hoặc dung môi trong khi sắc tố và dung môi di chuyển qua pha tĩnh không? Vì sao ở những pha tĩnh khác nhau kết quả các vạch sắc tố lại khác nhau?
Pha tĩnh có tương tác với dung môi theo nguyên tắc gần tương tự như kiểu micel. Nếu dung môi càng không phân cực, nó sẽ càng tách lớp so với pha tĩnh và không thắng được liên kết giữa chất tan-pha tĩnh tạo bởi các cầu nối Hydrogen (Em xem lại bài trả lời trước, trong trang web). Còn việc so sánh 2 giá thể, em phải tự trả lời.
3. Dung môi có tác dụng hòa tan và làm môi trường di chuyển cho sắc tố, ngoài ra nó còn có tác dụng gì nữa?
Ngoài tác dụng hòa tan chất và mao dẫn trên pha tĩnh, mỗi dung môi cho phép duy trì chất ở một trạng thái nhất định. Trạng thái tồn tại của chất cũng ảnh hưởng đến độ tan của nó (xem bài trả lời trước).
4. Trong hỗn hợp các dung môi, các dung môi riêng lẻ có tương tác gì lẫn nhau không?
Anh không có thực nghiệm chắc chắn về điều này nhưng nếu ai đó nói "nhờ có benzene, B-carotene được kéo lên trên và nhờ có ether dầu hỏa, chlorophyll được kéo lên thấp hơn" thì bị trừ điểm ngay
5. Trong lớp em hiện các bạn tranh cãi rất nhiều về vấn đề nay, các bạn vẫn chưa biết câu trả lời chính xác nhất.

Cau hoi cua H1T5
1) Dung moi chay tren gia the ran chi do luc mao dan hay ca luc mao dan va do phan cuc cua gia the ran deu anh huong den toc do chay cua dung moi tren gia the ran do?
Dung môi chạy trên giá thể rắn chủ yếu là nhờ lực mao dẫn, độ phân cực của giá thể sẽ ảnh hưởng đến tốc độ chạy.
2) Trong cac chat beta- carotene, chlorophyll a va b, pheophytin, xanthophyll, anthocyanin chat nao tan trong acetone, chat nao tan duoc trong benzene?
Câu này không trả lời nhé. Tụi em học tiếp xúc với khái niệm hằng số điện môi là để quên đi khái niệm tan, không tan, phân cực, không phân cực. Thay vào đó là phân cực đến mức nào, tan nhiều hay ít...
3) Theo em khi chay sac ki thi co 3 yeu to anh huong den vi tri vach sac to:
a. Khoi luong va hinh dang cua phan tu sac to (khoi luong cang nho, phan tu cang it cong kenh cang chay len cao).
b. Tuong tac giua sac to va gia the ran (sac to co su phan cuc thi chay tot tren gia the phan cuc).
c. Tuong thich giua dung moi va sac to (sac to tan tot trong dung moi nao thi chay tot khi dung dung moi do).
Trong do em nghi yeu to a quan trong nhat vi trong sac ki ban mong, dung moi 3:1:1 => yeu to b, c ko thich hop cho beta- carotene nhung beta- carotene lai la vach tren cung. Xin thay gop y cho em.
Trong thực tế sẽ có nhiều yếu tố tác động hơn nhưng nói chung là các yếu tố này tác động thông qua trạng thái của chất trong hỗn hợp hoặc sau khi đã gắn lên pha tĩnh. (Em xem thêm câu trả lời trong những thư trước).
Em nhận định yếu tố a quan trọng nhất là chưa chính xác (anthocyanin có cấu trúc đơn giản hơn Chl a, b, B-carotene). Nhưng không phủ nhận yếu tố "độ cồng kềnh" là một yếu tố ảnh hưởng (Kết quả điện di DNA thể hiện điều này rất rõ ràng, điện di cũng là một loại sắc ký). 2 yếu tố b và c sẽ cạnh tranh với nhau trong quá trình sắc ký và tùy thuộc vào yếu tố nào mạnh hơn và chất tan sẽ tách ra và được kéo đi. Nhờ được tách bằng cả 2 yếu tố mà độ phân giải của bản mỏng silicagel cao hơn hẳn so với giấy (ngoài ra còn một yếu tố phụ khác là độ mịn của hạt, pp điện di hay sắc ký nào cũng vậy, hạt vật chất càng mịn và càng đậm đặc thì độ phân giải sẽ càng cao, thời gian chạy cũng sẽ lâu hơn)

4) Trong buc anh em dinh kem theo mail:



Ban mong- dung moi 3:1:1
a. Theo em thi: Vach 8 la anthocyanin, Vach 5 la pheophytin, Cac vach 6, 7 la cac sac to xanthophyll. Xin thay gop y cho em. Neu minh chi tien hanh sac ki cac sac to: pheophytin a, pheophytin b, lutein, zeaxanthin, violaxanthin, antheraxanthin,…,anthocyanin vay vi tri cua no tren sac ki ban mong se nhu the nao so voi nhau?
Thực tế có chuyện này xảy ra, vị trí tương đối của vạch lutein thay đổi theo thời gian. Ban đầu nó ở dưới Chl a, b, nhưng sau đó nó leo lên trên, Rf của lutein trên cùng một bản mỏng ban đầu là 0.5-0.6 sau đó tăng lên 0.8. Điều này có thể do dung môi trong quá trình TN chưa bão hòa, các bạn chỉ cần xác định được B-carotene, Chla, b, lutein/xanthophyll và anthocyanin. Những vạch còn lại muốn xác định chi tiết cần có chất chuẩn.
b. Neu co cac manh vun li ti cua thanh phan te bao bi vo thi nhung manh vun do se nam trong vach nao trong so nhung vach tren hinh?
Câu này không trả lời nhé, cần phải gặp trực tiếp để xách lỗ tai.

Cau hoi cua Lam Thai Thanh
A. Nếu trong các hệ dung môi ta thay aceton bằng ethanol thì sao ạ?
Dĩ nhiên là sẽ có sự khác biệt. Năm ngoái, có một chị đã làm tn chiết bằng nhiều dung môi khác nhau, kể cả nước để thấy được sự khác biệt. Câu hỏi này rất thú vị, cũng với quy trình TN các bạn đã học, hãy dự đoán kết quả nếu chiết bằng nước, thay vì aceton. Có khi tụi em lại được thi câu này. @@.


B. Nếu trong dung môi ta gồm nhìu thành phần với nhiều độ phân cực khác nhau thì có cho sắc kí tốt hơn không?
Em đang nói đến dung môi sắc ký? Trạng thái và tính tan của một chất trong hỗn hợp dung môi phụ thuộc vào rất nhiều yếu tố, thành phần dung môi cũng là một yếu tố, không phải chỉ trộn lại cho nó ra hằng số điện môi bằng abc là được đâu.
C. Ngoài độ tan của giữa pha lõng và chất tan ảnh hưởng đến sắc kí thì còn có những tương tác nào giữa pha tính và chất tan, pha tính và pha lỏng?
Em xem lại những thư trước nhé
D. Điều gì sẽ xảy ra nếu như hệ dung môi không đồng nhất (các thành phần không tan vào nhau)?
Chắc là em đang nói đến dung môi pha động? Nếu như vậy thì liệu hệ dung môi bên dưới có chạy lên được? Thực tế là tôi cũng chưa được thấy kiểu này bao giờ, có chăng là mấy bạn lớp em hút 2 loại dung môi mà không trộn đều trước khi chạy, dẫn đến kết quả ra không đúng.

1/ Trong bài 4: Định lượng protein bằng phương pháp Bradford thì tổng thể tích mẫu các phân đoạn mình phải lấy như thế nào?
Lấy VD nhóm em tủa 10ml dịch thô bằng acetone thu tủa và hòa tan cho ra 1ml dịch tủa. Theo em thì nên lấy:
- 10ml dịch chiết thô
- 10ml dịch trong (lấy tương đối vì thực sự dịch trong thu đc sau tủa < 10ml)
- 1ml dịch tủa thu đc khi tủa 10ml dịch thô bằng acetone.
Vì như thế mình mới cơ sở so sánh được lượng protein có trong từng phân đoạn đc, còn nếu lấy lượng protein trong 1ml dịch thô so sánh với 1ml dịch tủa thì đương nhiên lượng protein trong 1 ml dịch tủa lớn hơn và em nghĩ việc so sánh như vậy là không có ý nghĩa. Vì theo lý thuyết thì protein (dịch thô) = protein (trong) + protein (tủa). Theo em dự đoán thì thực tế thì protein (dịch thô) > protein (trong) + protein (tủa). Xin cô góp ý cho em.
=> em suy nghi dung roi, va do vay em phai quy ham luong protein ve cung 1 nguon dich tho ban dau moi tien hanh so sanh duoc. Em phai luu y la 1ml dich tua amylase xuat phat tu 10ml dich tho ban dau, co nghia la toan bo luong enzym amylase coi nhu tap trung trong 1ml dich tua nay ma thoi, do do luong amylase co trong 1ml dich tua (a gam) cung chinh la luong amylase (a gam) co trong 10ml dich tho ban dau. Trong khi neu em tinh luong protein co trong 1ml dich tho thi luong protein trong 10ml dich tho fai gap 10 lan len. Khi em quy ve cung luong dich tho ban dau thi minh moi tien hanh so sanh duoc.

Do vay, Co khong can biet em lay tong the tich mau cac phan doan nhu the nao de dem di do Bradford, chi biet rang em lay chinh xac 10ml dich tho ban dau de tien hanh thu nhan 2 phan doan: tua (hoa trong x ml dd dem) va dich trong (do chinh xac toan bo the tich dich trong thu nhan duoc, vi du y ml). Khi do OD, em se co duoc nong do protein (ug/ml) co trong dich dem do, dich dem do duoc pha loang x lan thi khi tinh ham luong protein cua dich goc ban dau em phai nhan len lai x lan. Va nhu vay, em se co ham luong protein co trong 1ml dich tua, 1ml dich trong va 1 ml dich tho ban dau. Nhu Co da phan tich, luc nay, neu em muon so sanh thi em phai quy ve cung 10ml dich tho ban dau, nghia la:

Luong protein co tong cong trong 10ml dich tho = ham luong pro/1ml dich tho * 10ml

Luong protein co trong dich trong sau tua tu 10ml dich tho= ham luong pro/1ml dich trong * y ml

Luong pro amylase co trong dich tua tu 10ml dich tho=ham luong pro/1ml dich tua * x ml

Luc nay em moi so sanh va dua ra nhan dinh duoc. Hy vong em hieu duoc.

2/ Khi tủa protein bằng NaCl hay (NH4)2SO4 nếu mình sử dụng 80% nồng độ bão hòa thì chỉ có Amylase mới tủa hay có protein nào khác kết tủa cùng Amylase ko?
Trong hạt đậu xanh nảy mầm ngoài amylase còn enzyme nào chiếm lượng tương đối lớn không cô?
=> So voi cac nguon nguyen lieu khac thi hat dau xanh nay mam la doi tuong chua nhieu amylase hon ca, tuy nhien khong co nghia la dau xanh nay mam chi chua duy nhat amylase, no cung nhu bao co the sv khac, cung co nhieu enzyme co chuc nang cho 1 co the song khac nhu hydrolase, protease,...voi ham luong cung tuong doi cao

Theo nguyen tac: Moi 1 ptu protein co 1 cau truc nhat dinh cua no, do do se co 1 luong ptu nuoc nhat dinh bao boc xung quanh no cung nhu luc hut cua chung se co 1 do manh nhat dinh. Moi 1 tac nhan se co kha nang hut lay 1 luong nuoc nhat dinh. Vi vay ma muon tua loai protein nao (protein dich), chung ta can co 1 ty le tac nhan nhat dinh ma voi ty le do, tac nhan chi co the loai het ptu nuoc bao xung quanh protein dich ma thoi (o ty le do,cac protein khac se ko bi loai nuoc vi luc hut nuoc cua chung manh hon so voi protein dich, hoac tham chi 1 so protein bi loai nuoc nhung chua hoan toan cung ko the ket tua nhu protein dich), do vay xet ve nguyen tac se rat it protein co cau truc khac bi tua cung voi amylase, co chang la protein bi lan co kha nang giu nuoc rat giong voi amylase (thuong co cau truc tuong tu)>

3/ Khi hòa tủa vào đệm thì em thấy tủa chỉ tan một phần, phần còn lại lắng xuống đáy ống nghiệm. Theo em nghĩ là do một phần protein đã bị biến tính trong quá trình tủa. Xin cô góp ý cho em.
Trong bài có ghi tủa bằng dung môi hữu cơ trong thời gian ngắn và nhiệt độ thấp ko làm biến tính, trong thời gian dài và nhiệt độ phòng thì làm biến tính protein. Vậy nếu mình tủa bằng dung môi hữu cơ trong thời gian dài và nhiệt độ thấp thì protein có biết tính ko?
=> Dai la dai trong bao lau??giu o nhiet do thap se han che dc su bien tinh, nhung neu thoi gian tac dong cua tac nhan du dai de sau khi toan bo pro mat nuoc va ket cum lai roi ma tac dong cua tac nhan van con thi viec tac dong tiep tuc co the gay pha huy han cau truc von co cua protein la co the, cho nen co kha nang pro bi bien tinh lam chu (^_^)

cho e hoi:trong TN sac ki de quan sat sac to trong la cay,nguoi ta nghien la cay ra roi them vao mot it bot CaCO3. Vay viec them CaCO3 vao nay la de lam gi?

e muốn hỏi ì sao tách carotene lại dùng kiềm hóa? nếu chúng ta cho benzen vào trước thi sao ak

cho e hoi:trong TN sac ki de quan sat sac to trong la cay,nguoi ta nghien la cay ra roi them vao mot it bot CaCO3. Vay viec them CaCO3 vao nay la de lam gi? Sad

truong369 nghĩ là hút nước

Cảm ơn các anh nhe! có gì cho em hỏi thêm nhe!

truong369 đã viết:

cho e hoi:trong TN sac ki de quan sat sac to trong la cay,nguoi ta nghien la cay ra roi them vao mot it bot CaCO3. Vay viec them CaCO3 vao nay la de lam gi? Sad

truong369 nghĩ là hút nước

e ko nghi zay dau,neu hut nuoc thi phai cho vao nhieu hon chu ko phai chi la "mot it" nhu vay dc. hom wa ban e nao rang la de trung hoa acid huu co trong la cay,hok bit moi nguoi nghi sao ta?

hihi, truong369 k nhớ chính xác nữa, hồi làm thực tập bài này, cũng có thêm một muối nào đấy, thầy Hoàng nói là hút bớt nước bị giải phóng ra khỏi mô, thuận lợi cho quá trình lọc(*), vì nếu nước thấm nhiều trên giấy lọc sẽ hạn chế tinh thấm của dung dịch sắc tố qua giấy lọc ( vì đa phần là phân cực kém). Thấy CaCO3 là một muối háu nước, hút ẩm tốt nên truong369 suy ra.

(*): cái này truong369 đã bị dính chưởng rùi, hồi học hoá học cho CNSH, ly trích lycopen, do hai dung môi có độ phân cực khác nhau lớn nên phần không chảy qua giấy lọc phải...lấy thìa múc.